Tamara Ramirez Pavez¹, Antonio José Ruiz Alcaraz², María Vera³, Francisco Ródenas⁴, Antonio Guirado³, María Concepción Martínez-Esparza Alvargonzález², Maria Pilar García Peñarrubia²

(1) INMUNIDAD INNATA EN LA SALUD Y LA ENFERMEDAD, 30120, España (Región de Murcia)
(2) INMUNIDAD INNATA EN LA SALUD Y LA ENFERMEDAD, IMIB-Arrixaca, España
(3) Grupo de Investigación de Electroquímica Orgánica, Departamento de Química Orgánica, Universidad de Murcia, España (Región de Murcia)
(4) Universidad de Murcia, España (Región de Murcia)

Las hidrazidas son compuestos químicos orgánicos que poseen un grupo funcional (-NR-NR2-) que les permite recibir hasta cuatro sustituyentes, otorgándoles una alta versatilidad. Actualmente, existen fármacos como la isoniazida, que utilizan derivados de hidrazidas como principio activo. En este estudio se analizó el potencial antitumoral y antiinflamatorio de un nuevo compuesto derivado de hidrazidas (C4) en modelos celulares in vitro, y sus posibles efectos colaterales sobre células diferenciadas y microorganismos comensales.

Para evaluar el potencial antitumoral de C4, se midió su citotoxicidad sobre las líneas celulares tumorales HL-60 y K562 tras la exposición a concentraciones crecientes de C4 durante 24, 48 y 72 horas. Se corroboró el efecto antiproliferativo, y no citotóxico generalizado, mediante el mismo ensayo sobre células de tipo macrófagos obtenidas por la diferenciación de la línea celular HL-60 mediante el tratamiento con PMA. La actividad antiinflamatoria del compuesto C4 se evaluó mediante ELISA, midiendo los niveles de las citoquinas proinflamatorias IL-6, IL-1β y TNF-α producidas en cultivo por células de tipo macrófagos derivadas de HL-60 y por macrófagos peritoneales de mujeres con endometriosis, tras la exposición a dicho compuesto, evaluando también la viabilidad celular. Los resultados se analizaron con ANOVA de una vía seguido por la prueba de Dunnet. Para descartar efectos colaterales, se determinó la actividad de C4 sobre los microorganismos comensales E. coli DH5α y C. albicans SC5314 tratados con el compuesto de forma continua durante 24 horas (E. coli) y 48 horas (C. albicans).

C4 mostró una citotoxicidad máxima a la concentración 25 μM de 73,22% ± 4,08, 77,35% ± 3,94 y 81,25% ± 5,65 para las células HL-60 y de 58,24% ± 3,95, 66,65% ± 1,70 y 64,74% ± 9,67 para las células K562 a las 24, 48 y 72 horas de tratamiento respectivamente (Figura 1). La concentración inhibitoria media (IC50) del compuesto fue de 2,63 μM ± 0,24, 1,41 μM ± 0,11 y 1,63 μM ± 0,24 para HL-60 y de 2,56 μM ± 0.67, 3,02 μM ± 0,37, 2,31 μM ± 0.15 para K562 a las 24, 48 y 72 horas, respectivamente. Además, C4 disminuyó significativamente los niveles basales de TNF-α producidos por células de tipo macrófagos (Figura 2), pero no los de IL-1β ni IL-6. C4 no afectó la viabilidad de las células HL-60 diferenciadas, obteniendo una citotoxicidad máxima a la concentración 25 μM de 22,79% ± 2,32 a las 24 horas de incubación, y tampoco afectó el crecimiento de los microorganismos comensales analizados. C4 no fue tóxico para los macrófagos peritoneales de mujeres con endometriosis, pero sí disminuyó su metabolismo celular en un 22,49% ± 6,18 y 31,46% ± 4,14 para las concentraciones 5 μM y 25 μM respectivamente, tras la estimulación con LPS. Los resultados fueron similares para células no estimuladas. C4 disminuyó los niveles de TNF-α y IL-6 basales, pero debido a la escasez de muestras, no se realizaron análisis estadísticos.

C4 podría tener un alto potencial farmacéutico, ya que presenta una alta actividad antiproliferativa sobre líneas celulares, sostenible en el tiempo con bajas dosis. Además, C4 disminuyó 1 de 3 marcadores de inflamación evaluados en células HL-60 diferenciadas y 2 de 3 en macrófagos peritoneales de mujeres con endometriosis, sugiriendo una modulación del proceso inflamatorio. Además, el compuesto no mostró efectos indeseables sobre células diferenciadas y microorganismos comensales in vitro.